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中药三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根,皂苷类是其主要药效成分。文献报道三七总皂苷含量约为12%[1]。胶束毛细管电色谱法(HPCE)以其高效、快速、微量的优势在药物分析中得到广泛应用[2,3],本文采用三七皂苷R1、人参皂苷Rg1两个指标成分通过正交试验确定三七的最佳提取工艺。
1、仪器与药品
1.1、仪器
HP3DCE毛细管电泳仪(Agilent科技有限公司);未涂层石英毛细管柱(内径50μm,有效长度41.5cm,河北永年光导纤维厂);pH计(美国梅特勒公司);超纯水机(基因公司Maxima)。
1.2、药材
三七药材(市售,经西安交通大学生药教研室郭增军老师鉴定为真品);三七皂苷R1(中国药品生物制品鉴定所,批号:745-8801);人参皂苷Rg1(中国药品生物制品鉴定所,批号:0703-200119);乙腈(美国Fisher公司,色谱纯);超纯水(自制);其他药品均为分析纯。
2、方法及结果
2.1、毛细管电泳条件
以pH为9.0,20.0mmol/L的硼砂-硼酸缓冲体系加25mmol/L的SDS与乙腈4∶1(V/V)为电泳缓冲溶液,以未涂层石英毛细管柱(内径50μm,有效长度41.5cm)为分离通道,压力进样(50mbar×10s),分离电压20kV(25℃),检测波长202nm,所有溶液在使用之前均用聚乙烯滤膜(0.45μm)过滤,并超声除去细小气泡,每次电泳分离前,毛细管柱先用0.1mol/L NaOH、超纯水和电泳介质依次分别冲洗3.0、3.0、5.0min,然后进行分离和测定。
2.2、对照品、内标及供试品溶液的配制
2.2.1、对照品溶液的配制
精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1对照品4.4900mg和4.0212mg,50%甲醇定容于2ml容量瓶中,制备成2.2450mg/ml、2.0106mg/ml的对照品溶液,4℃储藏待用。
2.2.2、内标溶液的配制
精密称取3.0105mg淫羊藿苷,50%的甲醇定容于10ml容量瓶中,制备成0.3010mg/ml的内标溶液,4℃储藏待用。
2.2.3、供试品溶液的配制
收集提取液,用乙醚和水饱和的正丁醇各萃取3次,回收正丁醇,残渣用50%的甲醇溶解并定容于10ml容量瓶中,4℃储藏待用。
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